ABSTRACT Feed additives, such as β-glucans, nucleotides, ascorbic acid (vitamin C), and α-tocopherol (vitamin E) can improve fish immunity and contribute to enhanced zootechnical performance of the fish. This study aimed to evaluate the effect of different concentrations of vitamin- mineral premix with or without the inclusion of an immunostimulant boost (β-glucans, nucleotides and vitamins C and E) on the zootechnical performance, hemato-immunological parameters, histological changes, and survival of Nile tilapia juveniles. To this end, isocaloric and isoproteic diets were prepared with three different concentrations of vitamin-mineral premix (1.0, 1.5, and 2.0 kg ton-1); additionally, the effects of 4% immunostimulant boost in the diet were examined considering six diets (without the immunostimulant boost: 0.1%, 0.15%, and 0.2%, and with the immunostimulant boost: 0.1% I, 0.15% I, and 0.2% I). We used 24 experimental units, each including 15 fish. Nile tilapia juveniles (1.88 g±0.25) were fed for 50 d with supplemented diets. Further, zootechnical indexes; histological changes in the liver, spleen, and intestine; intestinal morphology; and hemato-immunological parameters were evaluated. The fish that received supplementation showed higher zootechnical values, compared to those that did not receive the supplementation of immunostimulant reinforcement. Weight gain (30.45g±3.06), daily weight gain (0.60g±0.06), final weight (32.41g±3.15) and feed conversion (0.95±0.06) were higher in tilapia fed with an inclusion concentration of 0.2%. Hematological parameters were not affected by either the pre-mix concentrations or the booster of the immunostimulant. There was an increase in the number of intestinal folds, length of the fold, total area and number of goblet cells in the group supplemented with immunostimulant reinforcement. Supplementation with the immunostimulant promoted growth and improved intestinal morphology and immunological parameters of Nile tilapia juveniles.

RESUMO Os aditivos alimentares, tais como β-glucanos, nucleotídeos, ácido ascórbico (vitamina C) e α-tocoferol (vitamina E), podem melhorar a imunidade dos peixes e contribuir para um melhor desempenho zootécnico. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes concentrações de premix vitamínico mineral com ou sem a inclusão de um imunoestimulante (β-glucanos, nucleotídeos e vitaminas C e E) no desempenho zootécnico, nos parâmetros hematoimunológicos, nas alterações histológicas e na sobrevivência dos juvenis de tilápia-do-Nilo. Para esse fim, foram preparadas dietas isocalóricas e isoproteicas com três concentrações diferentes de premix vitamínico e mineral (1,0, 1,5, e 2,0kg ton-1); além disso, foram examinados os efeitos da inclusão de 4% de imunoestimulante na dieta, considerando-se seis dietas (sem o imunoestimulante: 0,1%, 0,15% e 0,2%, e com a inclusão de imunoestimulante: 0,1% I, 0,15% I e 0,2% I). Foram utilizadas 24 unidades experimentais, cada uma com 15 peixes. Os juvenis de tilápia-do-Nilo (1,88g±0,25) foram alimentados, durante 50 dias, com as dietas suplementadas. Além disso, foram avaliados índices zootécnicos; alterações histológicas no fígado, baço e intestino; morfologia intestinal; e parâmetros hematoimunológicos. Os peixes que receberam suplementação apresentaram valores zootécnicos mais elevados, em comparação aos que não receberam a suplementação de reforço imunoestimulante. O ganho de peso (30,45g±3,06), o ganho de peso diário (0,60g ± 0,06), o peso final (32,41g±3,15) e a conversão alimentar (0,95±0,06) foram maiores nas tilápias alimentadas com uma concentração de inclusão de 0,2%. Os parâmetros hematológicos não foram afetados nem pelas concentrações de premix nem pelo reforço do imunoestimulante. Foi observado o aumento no número de pregas intestinais, no comprimento da prega, na área total e no número de células caliciformes no grupo suplementado com o boost imunoestimulante. A suplementação com o imunoestimulante promoveu o crescimento e melhorou a morfologia intestinal e os parâmetros imunológicos de juvenis de tilápia-do-Nilo.

In this study thirty shrimp samples from commercial marine shrimp (L. vannamei) farms of southern region of Brazil were obtained. Hepatopancreas and shell scrapings fragments collected in these animals were processed by transmission electron microscopy using negative staining (rapid preparation), immunoelectron microscopy and immunocytochemistry (immunolabelling with colloidal gold particles) techniques. On the transmission electron microscopy a great number of white spot virus particles, ovoid or bacilliform-to-ellipsoid, measured 230-290 nm in length and 80-160 nm in diameter with intra-nuclear projections were visualized by the negative staining technique in 27 (90%) out of 30 samples examined. Using immunoelectron microscopy technique, the anti-VP 664 serum agllutinated a large number of particles formed by antigen-antibody interaction. In the immunocytochemistry technique, the antigen-antibody reaction was styrongly marked by the particles of colloidal gold over the virus. Notably, this is the first report, to our knowledge, describing use of these microscopy techniques to study Brazilian L. vannamei marine shrimp samples; moreover, this methodology also appears to be a viable complementary tool for diagnosing the presence of the white spot virus within shrimp tissues. Importantly, these are the first photoelectron micrographs of the WSSV in Brazil.

Se obtuvieron para el estudio 30 muestras de camarones marinos comerciales (L. vannamei) de las granjas de la región sur de Brasil. Fueron procesados fragmentos de hepatopáncreas y raspados internos del cefalotórax recogidos en estos animales por microscopía electrónica de transmisión con tinción negativa (preparación rápida), inmunomicroscopía y técnicas de inmunocitoquímica (inmunomarcación con partículas de oro coloidal). En la microscopía electrónica de transmisión de un gran número de partículas de virus de la mancha blanca, ovoide o elipsoidal a baciliformes, medían 230-290 nm de longitud y 80-160 nm de diámetro. En 27 (90%) de las 30 muestras examinadas intra-nuclear proyecciones se visualizaron mediante la técnica de tinción negativa. Utilizando una técnica de inmunomicroscopía electrónica, el anti-suero VP 664 reunió a un gran número de partículas formadas por la interacción antígeno-anticuerpo. En la técnica de inmunocitoquímica, la reacción antígeno-anticuerpo fue fuertemente reforzada por las partículas de oro coloidal en los virus. En particular, en Brasil este es el primer informe, a nuestro entender, que describe el uso de estas técnicas de microscopía en muestras de camarón marino L. vanamei. Además, esta metodología también parece ser una herramienta complementaria viable para diagnosticar la presencia del virus de la mancha blanca en tejidos de camarón. Es importante destacar que estas son las primeras fotos en microscopia electrónica del WSSV obtenidas en Brasil.